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發酵工程培養基有哪些

發酵工程培養基主要使用發酵培養基：發酵培養基是指為了在生產中更加利于菌種代謝產物的生成而設計的培養基，這類培養基常見的主要有以下幾種：SOB（SuperOptimalBroth）培養基：是一種富營養培養基，其配方為：2%胰蛋白胨,0.5%酵母提取物,10mMNaCl,2.5mMKCl,10mMMgCl2,10mMMgSO4。與LB培養基相比，SOB培養基中含有兩倍多的蛋白胨，富含更多的氨基酸及多肽。此外，SOB培養基中含有鎂離子，鎂離子是高密度培養必須的離子。利用SOB培養基...

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流式細胞技術介紹

流式細胞技術是一項廣為使用、基于激光的生物學技術，利用流式細胞儀對處于快速流動的熒光染色的細胞或生物顆粒進行多參數、快速的定量分析和分選，是當代主要的細胞定量分析技術之一。主要有以下幾個特點：1.只要樣本制成單個細胞或生物顆粒懸液均可以分析。2.測量速度快，每秒鐘可以測量數千個乃至數萬個細胞3.同時測量每個細胞的多參數特征。4.在進行細胞特征分析的同時可以把有特征細胞分離出來(分選技術)關于流式細胞儀流式細胞儀由三部分構成——1.液流系統，包括流動室和液流驅動系統；2.光學系...

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Transwell實驗的步驟

本文主要介紹4種Transwell實驗的實驗步驟，具體包括：Transwell腫瘤細胞遷移實驗、Transwell上皮細胞培養實驗、TranswellB16細胞的體外遷移實驗、Transwell內皮細胞HMEC-1遷移實驗。一、Transwell腫瘤細胞遷移實驗過程與Transwell侵襲實驗基本一致，不同的只是不需要鋪Matrigel。由于沒有基質膠的阻擋，細胞穿過膜的速度較侵襲實驗明顯加快，所以細胞量要更大。我做侵襲實驗的細胞密度是1×10°，而遷移實驗的密度是1×10°...

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重組蛋白表達技術要點

大腸桿菌（E.coli）表達重組蛋白的技術經過多年的發展，已經成為一個非常成熟表達系統。為了在大腸桿菌表達體系中獲得可溶以高表達產量的蛋白，一個優秀的表達策略是重要的。為了高效表達有活性蛋白，一般需考慮以下幾個因素：1.宿主體系的選擇細菌、酵母、哺乳動物細胞、絲狀真菌和單細胞藻類均可以作為表達宿主，每一種表達宿主都有各自的優缺點。如果需要表達的蛋白具有真核的翻譯后修飾（糖基化修飾），那么可以選擇酵母、哺乳動物細胞等，而大腸桿菌等原核表達體系則不適用。大腸桿菌作為表達外源蛋白廣...

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凝膠電泳的染色方法

凝膠電泳是研究蛋白質性質的一種相對簡單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學、生物化學和分子生物學的主要工具。通過電泳分離蛋白質是基于這樣一個事實，即帶電分子將在施加電場時通過基質遷移。蛋白質電泳分離的基質是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內部的聚合形成了一個交聯的微孔網絡。這種孔隙網絡允許小蛋白質分子快速通過，同時減緩較大蛋白質的...

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