人多能干細胞（hPSC）具有自我更新和分化為各種細胞類型的潛能，為醫學、藥物研發和生命科學研究提供了不少貢獻。近年來，隨著生物技術的發展，hPSC的培養技術不斷優化，其中多層細胞工廠作為一種高效的2D培養方法，逐漸受到研究者的關注。本文將為您揭秘如何通過多層細胞工廠進行hPSC的2D培養。

一、多層細胞工廠的優勢

1. 高密度培養：多層細胞工廠采用層疊式設計，可充分利用空間，實現細胞的高密度培養，提高產量。

2. 易于操作：細胞工廠的操作簡便，便于規模化生產。

3. 條件均一：細胞工廠內環境穩定，有利于細胞生長和分化。

4. 產量可控：通過調整細胞工廠的層數，可輕松實現產量的調控。

二、如何通過多層細胞工廠進行hPSC的2D培養

1. 細胞接種

將hPSC接種到預先處理過的細胞工廠中，確保細胞均勻分布。接種密度可根據實驗需求進行調整。

2. 日常培養

接種后第1、3和4/5天進行補料，監測配套燒瓶以確定最佳收獲日期（≥ 90%匯合度）。具體操作如下：

（1）將廢培養基倒入廢液瓶中，更換新鮮培養基。

（2）更換培養基后放回培養箱。

3. 收獲細胞

當配套燒瓶匯合度達到90 - 95％時（接種后第5 - 6天）收獲細胞工廠的hPSC。具體步驟如下：

（1）將用過的培養基倒入廢液瓶中。

（2）用200 mL PBS沖洗細胞工廠。

（3）添加200 mL TrypLE™ Express或0.25%胰蛋白酶-EDTA。

（4）37°C孵育8 - 10分鐘。

（5）將200 mL ACF酶抑制溶液或TeSR™-AOF添加到燒瓶中，混勻后倒入無菌1 L瓶中。

（6）用400 mL無菌PBS沖洗細胞工廠，倒入同一無菌收集瓶中。

（7）將細胞懸浮液分裝到離心管中，離心后去除殘留的解離試劑，重新懸浮并匯集細胞。

三、實驗結果

1. 未分化狀態的標志物表達

從細胞工廠收獲的hPSC表達了未分化狀態的標志物，如OCT-4和TRA-1-60，超過90%的細胞均表達這兩種標記物。

2. 冷凍后仍保持高活力并有效附著

從細胞工廠收獲的單細胞hPSC在-135°C的FreSR™-S中冷凍后，仍保持高活力并有效附著。

3. 三譜系分化

從細胞工廠收獲的hPSC具有三譜系分化能力，可分化為定形內胚層、早期中胚層和神經祖細胞。

4. 保持正常核型

從細胞工廠收獲的hPSC保持正常核型，擴大培養規模后，細胞未檢測到額外的拷貝數變異。

通過本文的介紹，相信您已對如何通過多層細胞工廠進行hPSC的2D培養有了深入了解。多層細胞工廠作為一種高效的2D培養方法，為hPSC的研究和應用提供了有力支持。在今后的研究中，多層細胞工廠將繼續發揮其優勢，助力hPSC領域的發展。

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